Ujian Ku..

wahh...
hari ini senin tanggal: 22 november 2010,jam 14.00,,,ru aja bis ujian parasit,,hufh,,na g' tau,bakal berhasil po idak neh,,,ya ALLAH,,semoga jawaban ana benar and dapat nilai baik,,amINNN..
materi yang di ujiankan,,cukup banyak,,yaitu kelas Rizopoda,Sporozoa,,and flagellata..aku harus tetep berusaha teman,untuk keluarga ku, sahabat ku,,dan sama someone yang ku sayang!!!...
semoga ini tak sia-sia,,,

untuk dia,sahabat abadi ku..

"Dari MozaiK2 kkeliruan q kau hapus dg sjta kstia'n durasi arti shbt. kaU bwT smW mnjd mozaik2 it lbh indh dr smw kat2,kau bktiKAn mozaik it dg tingkah kasih,yg tak puts wlau halus,,kau jiwa yG tnanG,menenangi q, mozaik yg untk slalu kau kenang.."

...ANA...

syAiiirrrr!!

"mulailah lagi untuk tersenyum,dan mlhtkan wajh ceria mu itu,,
marah mu kan brubh jadi ramah.,tak usah kau kekkang rasa sakit
yang tak terbalas,,,kau tak sendri,aku dan smw tau kau yg trpilih
dari TUHAN untk menjd muslimah yang tegar dan sabar,,,
biarlah itu brlalu,,lepaskan dan lepaskan smwa tangis yg tak terbalas!!!"

.....ANA...

AKTIVITAS BIOKIMIA MIKROORGANISME

Bakteri memiliki berbagai aktivitas biokimia (pertumbuhan dan
perbanyakan) dengan menggunakan raw material (nutrisi) yang diperoleh
dari lingkungan sekitarnya. Transformasi biokimia dapat timbul didalam dan
diluar dari bakteri yang diatur oleh katalis biologis yang dikenal sebagai
enzim.
Setiap bakteri memiliki kemampuan dalam menggunakan enzim yang
dimilikinya untuk degradasi karbohidrat, lemak, protein, dan asam amino.
Metabolisme atau penggunaan dari molekul organik ini biasanya
menghasilkan produk yang dapat digunakan untuk identifikasi dan
karakterisasi bakteri.
pengamatan aktivitas biokimia atau metabolisme mikroorganisme
yang diketahui dari kemampuan mikroorganisme untuk menggunakan dan
menguraikan molekul yang kompleks seperti karbohidrat, lemak, protein dan
asam nukleat. Selain itu dilakukan pula pengamatan pada molekul-molekul
sederhana seperti asam amino dan monosakarida. Dan hasil dari berbagai uji
ini digunakan untuk perincian dan identifikasi mikroorganisme.
Penggunaan zat hara tergantung dari aktivitas metabolisme
mikroba. Metabolisme seringkali menghasilkan hasil sampingan yang dapat
digunakan untuk identifikasi mikroorganisme. Pengamatan aktivitas
metabolisme diketahui dari kemampuan mikroorganisme untuk menggunakan
dan menguraikan molekul yang kompleks seperti zat pati, lemak, protein dan
asam nukleat. Selain itu pengamatan juga dilakukan pada molekul yang
sederhana seperti amino dan monosakarida.

1. Fermentasi Karbohidrat
Kemampuan memfermentasikan berbagai karbohidrat dan produk
fermentasi yang dihasilkan merupakan ciri yang sangat berguna dalam
identifikasi mikroorganisme. Hasil akhir dari fermentasi karbohidrat ini
ditentukan oleh sifat mikroba, media biakan yang digunakan, serta faktor
lingkungan antara lain pH dan suhu. Media fermentasi harus mengandung
senyawa yang dapat dioksidasi dan difermentasikan oleh
mikroorganisme. Glukosa merupakan senyawa yang paling sering
digunakan oleh mikroorganisme dalam proses fermentasi itu. Selain itu
terdapat pula media sukrosa dan laktosa.
Fermentasi merupakan proses oksidasi biologi dalam keadaan
anaerob dimana yang bertindak sebagai substrat adalah karbohidrat.
Dimana hasil dari fermentase ini berbeda-beda bergantung pada jenis
bakterinya misalnya saja asam laktat, asam cuka, CO2 dan asam tertentu
lainnya.
Pada percobaan ini digunakan tiga medium yang berbeda yaitu LB,
SB, dan GB. Dan mikroorganisme yang digunakan Bacillus subtillis dan S.
epidermis. Dimana pada uji fermentasi karbohidrat ini, yang akan dilihat
adalah pembentukan asam yang akan terlihat dari perubahan warna
medium menjadi kuning dan pembentukan gas yang terlihat dari adanya
gas dalam tabung durham.
Perubahan warna medium mejadi kuning disebabkan karena
terdapatnya indicator brom timol blue (BTB) dalam medium. Dimana
penambahan indicator BTB ke dalam medium yang mengalami fermentasi
karbohidrat jadi asam dalam keadaan aerob, maka pH akan turun dan
akhirnya indikator BTB ini akan berubah warna menjadi kuning.
Beberapa mikroorganisme seperti E. coli, dapat menggunakan
laktosa sebagai sumber karbon. Selain laktosa, substrat alamiah dari
enzim, adalah bahan yang sangat penting, ONPG (o-nitro-phenyl-β-Dgalactopyranoside),
dapat digunakan pula. Β-galaktosidase dapat
mengkatalisis ONPG dengan reaksi sebagai berikut :
β-galaktosidase
ONPG + H20 galaktosa + o-nitrofenol
ONPG tidak berwarna tetapi setelah hidrolisis menjadi o-nitrofenol,
akan timbul warna kuning pada larutan yang alkali. Tes ini dapat
digunakan utuk identifikasi beberapa jenis bakteri.
Berikut ini beberapa jenis bakteri yang mampu melakukan
fermentasi terhadap karbohidrat serta hasil fermentasinya, adalah :
a) Fermentasi asam laktat : bakteri asam laktat (Streptococcus,
Lactobacillus)
b) Fermentasi alkohol : Zygomonas, Saccharomycetes
c) Fermentasi asam propionate : bakteri asam propionate
(Propionibacterium)
d) Fermentasi 2,3-butanadiol : Enterobacter, Serralia, Bacillus.
e) Fermentasi asam campuran : bakteri enterik (Escherichia,
Enterobacter, Salmonella, Proteus)
f) Fermentasi asam butirat : Clostridium
2. Uji MRVP
Uji metil red digunakan untuk menentukan adanya fermentasi asam
campuran. Dimana beberapa bakteri dapat memfermentasikan glukosa
dan menghasilkan berbagai produk yang bersifat asam sehingga akan
menurunkan pH media pertumbuhannya menjadi 5,0 atau lebih rendah.
Uji ini dilakukan untuk menghasilkan asam melalu proses hidrolisis yang
menghasilkan asam organik sederhana.
Pengujian dengan menggunakan metil merah, Voges-Proskeuer,
Uji Indole serta uji penggunaan sitrat sering dikenal sebagai tes IMViC
(indole, methyl red, Voges-Proskueur, dan citrate, serta “i” adalah
merupakan huruf penghubung). Tes IMViC ini digunakan untuk
membedakan beberapa bakteri golongan Enterobacteriaceae,
berdasarkan kemampuannya dalam memfermentasi glukosa dan laktosa,
penguraian triptosan yang menghasilkan indole serta adanya enzim sitrat
permease yang mampu menguraikan natrium sitrat dari medium khusus
yang digunakan.
Pada percobaan ini, penambahan indikator metil red pada akhir
pengamatan dapat menunjukkan perubahan pH menjadi asam. Metil red
akan menjadi merah pada suasana asam (pada lingkungan dengan pH
4,4) dan akan berwarna kuning pada suasana basa (pada suasana lebih
dari atau sama dengan 6,2). Uji ini berguna dalam identifikasi kelompok
bakteri yang menempati saluran pencernaan, seperti pada golongan
coliform dan enterobacteriaceae.
Berikut ini reaksi biokimia yang terjadi pada penguraian glukosa
yang menghasilkan berbagai asam yang mampu mengubah pH sehingga
mampu mengubah warna indicator pada Uji Metil merah :
Glukosa 2 piruvat
E. aerogenes
E. coli Asam
Aseta,
Suksinat,
Laktat,
Format
Asam
Format dan
laktat.
Etanol,
Asetil Co-A,
2,3-butanadiol
CO2 + H2 (pH 6,0)
CO2 + H2 (pH 4,0)
Uji Voges-Proskueur digunakan untuk mengidentifikasi
mikroorganisme yang melakukan fermentase dengan hasil akhir 2,3
butanadiol. Bila bakteri memfermentasikan karbohidrat menjadi 2,3
butanadiol sebagai produk utama, akan terjadi penumpukan bahan
tersebut dalam media pertumbuhan. Pada uji VP ini dilakukan
penambahan 40% KOH dan 5% larutan alfa naftol pada saat
pengamatan. Hal ini dapat menentukan adanya asetoin (asetil metil
karbinol), suatu senyawa pemula dalam sintesis 2,3 butanadiol.
Dengan adanya penambahan KOH 40 %, keberadaan setoin
ditunjukkan dengan perubahan warna medium menjadi merah, dan
perubahan ini makin jelas dengan penambahan alfa naftol beberapa tetes.
Uji VP ini sebenarnya merupakan uji tidak langsung untuk mengetahui
adanya 2,3 butanadiol. Karena uji ini lebih dulu menentukan asetoin, dan
seperti yang kita ketahui bahwa asetoin adalah senyawa pemula dalam
sintesis 2,3 butanadiol, sehingga dapat dipastikan bahwa dengan adanya
asetoin dalam media berarti menunjukkan adanya produk 2,3 butanadiol
sebagai hasil fermentasi.
Mekanisme terjadinya reaksi pada Uji Voges-Proskueur dapat
digambarkan sebagai berikut :
40% KOH
Acetoin + α-naftol diasetil + keratin (kompleks pink)
Alkohol absolute
3. Uji katalase
Beberapa bakteri yang memiliki flavoprotein dapat mereduksi O2
dengan menghasilkan hidrogen peroksida (H2O2) atau superoksida (O2
-).
Kedua bahan ini merupakan bahan yang toksik dan menghancurkan
kompenen sel dengan sangat cepat. Bakteri harus dapat
mempertahankan diri seperti dengan produksi O2 atau akan terbunuh.
Beberapa bakteri dapat memproduksi enzim yang dapat
mengkatalisis superoksids yaitu peroksida dismutase, dan juga katalase
atau peroksidase yang dapat mendekstruksi hidrogen peroksida.
Katalase adalah enzim yang mengkatalisasikan penguraian
hydrogen peroksida (H2O2) menjadi air dan O2. Hidrogen peroksida
terbentuk sewaktu metabolisme aerob, sehingga mikroorganisme yang
tumbuh dalam lingkungan aerob dapat menguarikan zat toksik tersebut.
Uji katalase ini dilakukan untuk mengidentifikasi kelompok bakteri
bentuk kokkus, dalam membedakan Staphylococcus dan Streptococcus.
Dimana kelompok streptococcus bersifat katalase negative dan
Staphylococcus bersifat katalase positif.
Penentuan adanya katalase ini terlihat dari pembentukan
gelembung udara di sekitar koloni setelah ditambahkan larutan H2O2 3%.
Reaksi kimiawi yang dikatalisasikan oleh enzim terlihat sebagai berikut :
superoksida
2 O2 + 2H+ O2 + H2O2
desmutase
H2O2 Katalase H2O + ½ O2 (gelembung udara)
Peroksidase
4. Uji Produksi Indol
Mikroorganisme menggunakan asam amino sebagai pemuka
protein, komponen sel dan kadang kala sebagai sumber energi. Asam
amino ini dimodifikasikan dengan berbagai cara sewaktu metabolisme.
Dalam percobaan diperlihatkan berbagai cara mikroorganisme
memodifikasikan asam amino. Dimana modifikasi asam amino dapat
digunakan untuk pengidentifikasian untuk suatu jenis bakteri.
Asam amino triptofan merupakan komponen asam amino yang
lazim terdapat pada protein, sehingga asam amino ini dengan mudah
dapat digunakan oleh mikroorganisme. Dimana asam amino triptofan
apabila dihidrolisis oleh enzim triptofamase akan menghasilkan indol dan
asam pemuat.
Untuk uji ini, digunakan medium cair yang kaya akan triptofan yaitu
dalam bentuk tripton 1% sebagai sumber karbon. Indol yang terbentuk
akan berwarna merah dengan penambahan reagen Kovach atau Erlich
yang mengandung p-dimetilbenzaldehid. Dikatakan positif apabila
senyawa ini menghasilkan senyawa para amino benzaldehid yang tidak
larut dalam air dan membentuk warna merah pada permukaan medium.
Mekanisme terjadinya reaksi dapat digambarkan sebagai berikut :
Reagen Kovac
HCl+ Amil alkohol
Indole + p-dimetilamino benzldehid Rosindole dye
(berwarna merah ceri)
5. Uji deaminase asam amino
Deaminasi adalah proses mengkatalisasi pemindahan gugus amino
(NH2) dari asam amino dan molekul lainnya yang mengandung –NH.
Asam organik yang dihasilkan dapat digunakan mikrooganisme untuk
biosintesis. Selain itu, proses deaminasi menetralisasikan amin yang
menghambat pertumbuhan.
Uji deaminasi asam amino dapat digunakan untuk identifikasi
mikroorganisme aluran pencernaan. Untuk melakukan uji ini,
mikroorganisme ditumbuhkan dalam medium biakan yang mengandung
asam amino yaitu peptone cair. Dan pada pengamatan ditambahkan
reagen Nessler sebanyak 1 tetes. Reagen Nessler ini merupakan pereaksi
spesifik untuk identifikasi adanya ammonia (NH3).Hasil uji positif jika pada
akhir pengamatan menunjukkan perubahan warna kuning, karena warna
kuning menunjukkan bahwa asam amino telah dideaminasi.
6. Penggunaan sitrat
Uji sitrat merupakan salah satu pengujian dari kelompok tes IMViC.
Pengujian ini digunakan untuk melihat kemampuan mikroorganisme
menggunakan sitrat sebagai satu-satunya sumber karbon dan energi.
Untuk uji ini digunakan medium sitrat koser (SCA) yang merupakan
medium sintetik dengan Na sitrat sebagai satu-satunya sumber karbon,
NH4
+ sebagai sumber N dan indikator BTB (Brom Timol Blue) yang
merupakan indikator pH.
Bila mikroba mampu menggunakan sitrat, maka asam akan
dihilangkan dari medium biakan, sehingga menyebabkan peningkatan pH
dan mengubah warna medium dari hijau menjadi biru.
Citrat permease
Natrium sitrat Asam piruvat + Asam oksaloasetat + CO2
Citratase
Kelebihan natrium dari Na.sitrat + CO2 + H2O Na2CO3
(alkali), pH meningkat (indicator BTB menunjukkan warna biru).

7. Uji motility
Motilitas adalah salah satu dari ciri mahluk hidup, begitu pula
dengan mikroorganisme, namun alat geraknya masih sederhana berupa
flagella atau cilia. Bakteri melakukan motilitas dengan menggunakan
energi yang diperoleh dari ATP yang diuraikan oleh koenzim ATP-ase
membentuk fosfo anorganik.
Beberapa protein kaya akan asam amino yang mengandung gugus
sulfur seperti sistein. Jika protein ini dihidrolisis oleh bakteri, asam amino
akan dilepaskan. Sistein dengan adanya sistein desulfurase, ahan
melepaskan atom sulfur yang dengan adanya hydrogen dari air akan
membentuk gas hydrogen sulfide. gas ini juga dapat diproduksi dengan
reduksi senyawa anorganik yang mengandung sulfur seperti tiosulfat,
sulfat atau sulfit.
Pada percobaan ini, sebagai petunjuk adanya aktivitas motilitas ini
dapat diamati daerah bekas tusukan dari medium yang telah
diinokulasikan oleh biakan dan diinkubasikan. Medium ini ditambahkan
senyawa anorganik yang mengandung sulfur, yaitu natrium tiosulfat.
Natrium tiosulfat ini akan bereaksi dengan ion hidrogen dari air, dan
dengan adanya enzim tiosulfat reduktase, maka akan dihasilkan ion sulfit
dan gas H2S. Gas ini akan bereaksi dengan feri ammonium sulfat yang
datambahkan (sebagai indicator untuk H2S) ke dalam media sehingga
terbentuk FeS yang berwarna hitam. Pembentukan FeS inilah yang
diamati sebagai penunjuk adanya aktivitas motil dari bakteri uji pada
tabung yang berisi medium motility setelah diinkubasikan.
Berikut ini adalah mekanisme reaksi yang terjadi pada uji motilitas :
8. Uji oksidasi fermentasi
Fermentasi dan oksidasi adalah dua proses penting dalam
metabolisme mikroorganisme. Dimana tujuan akhirnya adalah akumulasi
energi, baik untuk aktivitas mikroorganisme maupun untuk proses-proses
biologis lain. Oksidasi umumnya dilakukan pada respirasi aerobic
menghasilkan CO2 dan H2O, sedangkan fermentasi menghasilkan etanol
dan gas. Adapun uji ini dilakukan untuk mengetahu kemampuan
mikroorganisme untuk menggunakan karbohidrat dengan cara fermentasi
atau oksidasi.
9. Uji H2S
Pengujian ini menggunakan medium TSIA (Triple Sugar Iron Agar),
uji ini digunakan untuk membedakan antara anggota kelompok
Enterobacteriaceae dan membedakan kelompok Enterobacteriaceae
dengan kelompok lainnya.
Pada uji ini digunakan bakteri Bacillus subtillis dan S. epidermis
dengan menggunakan medium TSIA yang mengandung tiga macam gula
yaitu glukosa, laktosa, dan sukrosa. Kemudian diinkubasi selama 7x24
jam pada suhu 37oC.
H2S diproduksi oleh beberapa jenis mikroorganisme melalui
pemecahan asam amino yang mengandung unsur belerang (S) seperti
lisin dan metionin. H2S dapat juga diproduksi melalui reduksi senyawasenyawa
belerang anorganik, misalnya : tiosulfat, sulfit atau sulfat.
Adanya H2S dapat diamati dengan menambahkan garam-garam logam
berat ke dalam medium. Dikatakan positif apabila H2S bereaksi dengan
senyawa-senyawa ini ditandai dengan terbentuknya logam sulfit yang
berwarna hitam. Dan dikatakan negatif apabila tidak terbentuk logam sulfit
yang berwarna hitam karena bakteri yang berada dalam medium tersebut
tidak dapat menghidrolisis logam-logam berat yang terkandung dalam
medium.
Pada percobaan ini, reaksi yang dapat timbul adalah :
a) Kuning pada butt (dasar) dan merah pada slant (permukaan miring),
menunjukkan adanya fermentasi glukosa.
b) Kuning pada butt dan slant, menunjukkan adanya fermentasi laktosa
dan/atau sukrosa.
c) Pembentukan gas, yang ditandai dengan pembentukan ruang udara
dibawah medium sehingga medium terangkat ke atas.
d) Pembentukan gas (H2S), terlihat dari pembentukan warna hitam pada
medium.
e) Merah pada butt dan slant, menunjukkan tidak adanya fermentasi gula
dan pembentukan gas atau pembentukan H2S.

LAMPIRAN
Komposisi Medium

1. Gelatin
Gelatin 150 g
Aquadest 1000 ml

2. Koser Citrat Agar (SCA)
NaCl 5 g
MgSO47H2O 0,28 g
(NH4)2HPO4 1 g
K2HPO4 1g
Asam sitrat 2 g
Aquadest 1000 ml

3. LB
Pepton from gelatin 3 g
Meat ekstrak 3 g
Lactosa 5 g
Aqua destillata 1000 ml

4. NB
Peptone from meat 2 g
Ekstrak Beef 3 g
Aquadest 1000 ml

5. OF (Hug and Leifson)
Pepton 2 g
NaCl 5 g
K2HPO4 0,3 g
Agar 3,8 g
Brom Thymol Biru 1% 15 mL
Aquadest 1000 ml

6. MR dan VP (glukosa fosfat Broth)
D- glukosa 0,5 g
K2HPO4 0,5 g
Peptone 0,5 g
Aquadest 1000 mL

7. SIM (Motility)
Pepton dari kasein 20,0 g
Pepton daging 6,6 g
NH4Fesitrat 0,2 g
Na2S2O3 0,2 g
Agar 3,0 g
Aquadest 1000 ml

8. Medium tripton 1 %
Tripton 10 g
Air suling 1000 ml

9. Medium gelatin
Gelatin 150 g
Air suling ad 1000 ml

10.Medium peptone cair 1%
Pepton 10 g
Aquadest 1000 ml
11.Medium NA
Pepton from meat 5 g
Ekstrat meat 3 g
Agar 12 g

12.Medium motility
Gelatin 80 g
Peptone from meat 10 g
Ekstrak beef 3 g
Sodium chloride 3 g
Agar 30 g
Aqua destillata 1000 ml

DAFTAR PUSTAKA
1. Djide, Natsir & Sartini. 2006. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Laboratorium
Mikrobiologi Farmasi. Universitas Hasanuddin. Makassar ; 123.
2. Dwijoeseputro. 1990. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Djambatan. Malang ;
73, 74.
3. Prescott, Harley. 2002. Laboratory Exercises in Micrrobiology. The
MC-Graw Hill Companies. New York ; 126, 139.